基因組提取試劑盒真菌基因組DNA提取試劑盒
貨號：D2300
規格：50T、100T
保存：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復檢期 12 個月，2℃-8℃保存時間更長 。

產品說明：
    真菌是具有真核和細胞壁的異養生物。種屬很多，已報道的屬達 1 萬以上，種超過 10 萬個。真菌通常又分為三類，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌） 。對于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠處理，而對于大型真菌，可直接用液氮研磨。經過前期處理的菌液，用硅質膜吸附，即可得到高純度的基因組。提取純化后的 DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游應用實驗。

操作步驟：
    使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1、樣品的處理：
    1）對于酵母菌，取 1-2ml 培養好的菌液，離心收集，棄上清。加入 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5-10min。
    2）霉菌(孢子也可相同處理)：取 50-100mg 菌絲，加 200ul 溶液 A，用玻璃研磨器適當研磨分散菌絲，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 30min。
    3）大型真菌（如蘑菇等） ：稱取 50-100mg 樣品，倒入適量的液氮，立即研磨重復 3 次，使樣品研成粉末（如無液氮， 可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器適當研磨） ， 加 200ul 溶液 A， 加入 20ul RNase A， 再加入 100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5min。
2、 加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K， 充分混勻， 55℃水浴消化， 30min。 消化期間可顛倒離心管混勻數次， 12000rpm離心 2min。將上清轉移到一個新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。
3、在上清中加入 200ul 溶液 B，充分混勻。如出現白色沉淀，可放 55℃水浴 5min，沉淀即會消失，不影響后續實驗。如溶液未變清亮，說明樣品消化不*，可能導致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導致上柱后堵柱子，請增加消化時間。
4、再加入 200ul 無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置 2 分鐘。
5、12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR 等。
9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm 離心 1min。
10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 2min，即可得到高質量的基因組DNA。

注意事項:

1. 由于真菌種類萬千，對于一些特別難處理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振蕩，蛋白酶K處理，一般都可以得到一定量的基因組DNA，如電泳檢測很弱，一般PCR都會有較好結果。
2. 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在 55℃水浴中重新溶解。
3. 如果DNA提取量很少，可加長玻璃珠處理時間，如果提取DNA成彌散短條帶，可減少玻璃珠處理時間。
4. 洗脫緩沖液的體積好不少于 50ul，體積過小會影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在 8.0 左右(可用NaOH將水的pH值調此范圍)，pH值低于 7.0 會降低洗脫效率；DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。
5. DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應在OD 260 處有顯著吸收峰，OD 260 值為 1 相當于大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD 260/ OD 280 比值應為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。
6. 在確保樣品無誤的情況下，如經過多次試驗，都無法提出DNA，請將部分樣品寄我公司，我們代為摸索優化條件，以使您的實驗能夠正常進行下去。

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運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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