吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào)：BC4105
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入5 mL蒸餾水備用，2-8℃保存兩周。

2. 試劑三：臨用前加入5.71 mL 50% 乙醇（乙醇（V）：H₂O（V）=1：1）溶解備用。可以-20℃分裝保存兩周，避免反復(fù)凍融。

3. 試劑五：臨用前加入10 mL試劑四溶解備用，2-8℃保存兩周。

4. 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg吲哚乙酸。臨用前加入1.14 mL 50%乙醇（乙醇（V）：H₂O（V）=1：1）溶解制成50 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，-20℃分裝保存兩周，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：
吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破壞失去活性。IAA氧化酶能調(diào)節(jié)植物體內(nèi)吲哚乙酸的的水平，從而影響植物的生長。
IAA在無機(jī)酸條件下與FeCl₃作用生成紅色產(chǎn)物，在530nm下有最大吸收峰。酶活力的大小可用消耗IAA的速率表示。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
1、當(dāng)ΔA大于0.4或者A對照管大于1時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測定；ΔA過小時(shí)，可增加酶促反應(yīng)時(shí)間（1h或2h）或增加加入的樣本體積來測定。注意同步修改計(jì)算公式。
2、試劑一溶解變黑后則不能使用；試劑二有毒性，做好防護(hù)措施。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g紅豆加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，用96孔板測得計(jì)算ΔA測定=A對照-A測定=0.477-0.402=0.075，帶入標(biāo)曲y=2.7049x-0.0154，得出x=0.0334，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：IAA酶活（U/g質(zhì)量）=333×x÷W=333×0.0334÷0.1=111.22 U/g 質(zhì)量。

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