游離血紅蛋白（FHb）含量檢測試劑盒說明書

微量法

貨號：BC559

規格：100T/96S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 工作液：臨用前根據樣本量按照試劑一：試劑二：試劑三=500μL：500μL：25μL（1.025mL，約4T）的比例配制工作液，現用現配。

2. 標準品：5mg血紅蛋白，臨用前加入1mL蒸餾水，充分混勻，配制成5mg/mL標準液，2-8℃可保存4周。

產品說明：

血管內發生溶血時，紅細胞破裂，釋放出血紅蛋白，血漿中游離血紅蛋白（free hemoglobin，FHb）增多。自身免疫性溶血性貧血、鐮刀型細胞貧血、珠蛋白生成障礙性貧血患者血漿FHb有輕度至中度增加，陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥、陣發性嚴寒性血紅蛋白尿癥、不穩定血紅蛋白病等會出現血尿癥狀。因此，血漿中FHb的測定對于臨床診斷溶血性疾病有重要作用。

血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的催化活性，能夠催化過氧化氫氧化4-氨基安替*林和苯胺類似物，生成紫色化合物，其在546nm有特征吸收峰，其顏色深淺與FHb含量成正比。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

注意事項：

1. 若測定血漿樣本，采樣和分離血漿過程中避免發生溶血。

2. 若樣本測定管吸光值A測定＞1，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定。

3. 若樣本測定管吸光值A測定＜0.01或接近空白管吸光值，建議將樣本加樣量增大后再進行測定，空白管和標準管加樣量也需進行相應調整。

實驗實例：

1. 取15µL兔血清樣本，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算：ΔA測定=A測定-A空白= 0.195-0.096=0.099，根據標準曲線y=0.0056x-0.03，計算x=23.036，計算FHb含量得：

游離血紅蛋白（FHb）含量（mg/L）=x×F=23.036 mg/L。

2. 取15µL馬血清樣本，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算：ΔA測定=A測定-A空白= 0.136-0.096=0.040，根據標準曲線y=0.0056x-0.03，計算x=12.5，計算FHb含量得：

游離血紅蛋白（FHb）含量（mg/L）=x×F=12.5 mg/L。

參考文獻：

[1] Reeder B, Svistune nko D, Cooper C, et al. The radical and redox chemistry of myoglobin and hemoglobin: from in vitro studies to human pathology [J]. Antioxid Redox Signal, 2004, 6(6): 954-966.

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