β-半乳糖苷酶染色試劑盒

產品說明：
(β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時 SA-β-Gal (senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上調而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養細胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。β-半乳糖苷酶試劑盒以 X-Gal 為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產物，光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細胞，對衰老前的細胞(presenescent cells)、靜止期細胞(quiescent cells)、永生細胞(immortal cells)或腫瘤細胞等不會染色。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數量視樣品的大小而定，對于普通的切片也少足夠檢測 100 個樣品，使用 6 孔板測定，足夠測定 100 個樣品。

自備材料：
PBS 或 HBSS 、細胞培養器皿 、顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：
(一) 貼壁細胞染色：
1、 對于 6 孔板中培養的細胞，吸除細胞培養液，用 PBS 或 HBSS 洗滌 1 次，加入 1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定 15min。對于其它類型的培養板，固定液及后續溶液的用量參照此比例進行操作。
2、 吸除細胞固定液，用 PBS 或 HBSS 洗滌細胞 3 次，每次 3min。
3、 吸除 PBS 或 HBSS，每孔加入 1ml 染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。

染色工作液的配制方法參考表 1。
表 1：染色工作液的配制方法:
β-半乳糖苷酶染色液 A 10μl
β-半乳糖苷酶染色液 B 10μl
β-半乳糖苷酶染色液 C 930μl
X-Gal 溶液 50μl

說明：對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌；而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。
4、 37℃孵育過夜，可以用 parafilm 或保鮮膜封住 6 孔板防止蒸發。
注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。
5、 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以去除染色工作液，加入 2ml PBS，4℃可以保存數天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。
(二) 懸浮細胞染色：
1、 離心收集細胞 1.5ml 離心管內，用 PBS 或 HBSS 洗滌 1 次，加入 1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15min。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細胞結成團塊。
2、 離心，吸除細胞固定液，用 PBS 或 HBSS 洗滌細胞 3 次，每次 3min。
3、 離心，吸除 PBS 或 HBSS，每管加入 0.5-1ml 染色工作液。
染色工作液的配制方法參考表 1。
4、 37℃孵育過夜。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。
5、 取部分染色后的細胞，滴加到載玻片上或 6 孔板內，普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以離心，去除染色工作液，然后加入 1ml PBS，4℃可以保存數天。如果離心，取細胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。
(三) 組織切片染色：
1、 對于石蠟切片先按照常規方法進行脫蠟和水化處理。對于冷凍切片直接按照以下步驟進行。
2、 加入適當體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于 15min。
3、 用 PBS 浸泡洗滌組織 3 次，每次不少于 5min。
4、 吸除 PBS，加入適當量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表 1。
5、37℃孵育過夜，可以用 parafilm 或保鮮膜封住防止蒸發。把整個切片浸泡在染色工作液中。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。
5、 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，加上封片液封片后 4℃可以保存較長時間。

注意事項：
1、 β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意防護。
2、 β-半乳糖苷酶染色反應依賴于特定的 pH 條件，不能在二氧化碳培養箱中進行染色反應。用于細胞培養的二氧化碳培養箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的 pH 值，而導致染色失敗。
3、 β-半乳糖苷酶染色液 B 在剛剛溶解后會觀察到有沉淀，屬正常現象，充分混勻或 Vortex 后，沉淀會全部溶解。作為常規，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解，并且混勻。
4、 配制染色工作液時需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。但染色時可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進行，例如普通的 6 孔板就可以用作染色的容器。
5、 需自備 PBS 或 HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
6、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關文獻：

《Exosomes from hyperglycemia-stimulated vascular endothelial cells contain versican that regulate calcification/senescence in vascular smooth muscle cells》 作者:Shuang Li, Jun-Kun Zhan, Yan-Jiao Wang, Xiao Lin, Jia-Yu Zhong, Yi Wang, Pan Tan, Jie-Yu He, Xing-Jun Cui, Yi-Yin Chen, Wu Huang and You-Shuo Liu 期刊:Cell & Bioscience 影響因子:3.355 PMID:30622695

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